Fluorescence microscopy: prionnsapalan air an dòigh

Chiad sreath agus ath-sgaoilidhean solas tuilleadh inorganic agus lionn-bheairteach mar thoradh air sionnachan air ceann no fluorescence. An diofar eadar na phenomena a tha an ùine a 'chiad sreath eadar-ceada agus sgaoilidhean solas flux. Nuair a fluorescence dhe na pròiseasan sin a 'tachairt cha mhòr aig an aon àm, fhad' sa sionnachan air ceann - le beagan dàil.

fiosrachadh eachdraidheil

Ann an 1852, Bhreatainn saidheans Stokes, iomradh an toiseach fluorescence. Tha e a-steach ùr-ùine mar thoradh air na deuchainnean le fluorspar, a-mach solas dearg fo ultraviolet solas. Stokes fa-near inntinneach iongantas. Tha e air lorg gu bheil an wavelength an stuth sruth rèididheachd a tha an-còmhnaidh nas motha na an sruth a 'excitation solas.

A 'dearbhadh na beachd-bharail san 19mh linn a tha air a bhith iomadh deuchainn. Sheall iad gun robh caochladh de shampaill fluoresce fo bhuaidh na ultraviolet solas. Am measg nan stuthan, am measg rudan eile, a bhith na criostalan, resins, mèinnearaich, chlorophyll, amh drogaichean, inorganic fhillte, beothamain, ola. Tha dìreach cleachdadh dathan airson deuchainnean bith-eòlasach a-mhàin a thòisich ann an 1930

Fluorescence microscopy: Tuairisgeul

Tha cuid de na stuthan a chleachdadh anns a 'chiad leth dhen 20mh linn rannsachaidhean a thaisbeanadh àrd specificity. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Taing do an coileanadh, nach gabhadh a choileanadh le dòighean eadar-dhealaichte, an dòigh fluorescence microscopy air a bhith riatanach ann an inneal Bith-eòlasach agus rannsachadh. Toraidhean a cheart cho cudromach a bha còir aige, agus airson stuthan.

? Dè na buannachdan a tha an dòigh fluorescence microscopy? A 'cleachdadh stuthan ùra air a bhith comasach agus an taghadh de leth sònraichte cealla submicroscopic phàirtean. Fluorescence microscopy urrainn lorg aon molecules. Tha diofar dathan a 'leigeil a' comharrachadh iomadh nithean aig an aon àm. A dh'aindeoin a 'bheagan spàsail rùn na diffraction crìoch an uidheam, a tha, ann an tionndadh, an crochadh air feartan sònraichte an t-sampall, a' comharrachadh gu h-ìosal molecules an ìre seo tha e cuideachd math 'sa ghabhas. Various sampaill an dèidh irradiation thaisbeanaidh autofluorescence. Iongantas seo ga chleachdadh gu bitheanta ann an Petrology, luibh-eòlas, an semiconductor gnìomhachas.

feartan

Sgrùd beathach nèapraigean no bhitheagan gu tric iom-fhillte no ro lag no làidir fìor neo- mhionaideach autofluorescence. Ach, tha an luach ann an sgrùdaidhean Fhuair toirt a-steach a-steach an stuth phàirtean togail-inntinn aig sònraichte wavelength agus emitting riatanach solas sruth dian. Fluorochromes mar dathan comasach air an ceann fhèin ceangailte ri structaran (follaiseach no neo-fhaicsinneach). Mar so tha iad àrd-thaghadh gus an targaid, agus eòlaichean toradh.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Fluorescence microscopy air a bhith air a chleachdadh gu bitheanta thòisich dathan nàdarra agus fuadain. Shealbhaich iad dian pròifil sònraichte de sgaoilidhean agus excitation agus a 'cuimseachadh gu sònraichte targaidean bith-eòlasach.

Comharrachadh fa leth molecules

Gu math tric, ann an freagarrach h-, faodaidh tu clàradh air leth eileamaid shoillse. Airson seo, am measg rudan eile, tha e riatanach a thoirt seachad gu leòr ìosal fuaim na lorgair agus an Optical chùl. Fluorescein moileciuil sa chruinne-fàilligeadh air sgàth photobleaching urrainn-mach suas ri 300 mìle. Photons. Aig 20% chruinneachadh èifeachdas a 'phròiseas agus a chlàradh dhaibh ann an tomhas de mu 60 mìle.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Fluorescence microscopy stèidhichte air maoim-sneachda photodiodes no eileagtronaigeach iomadachadh, cead an luchd-rannsachaidh a 'faicinn giùlan fa leth tro molecules an dara, agus ann an cuid de chùisean fiù' s mionaid.

iom-fhillteachd

Chaidh prìomh chùis a tha a 'fàbharachadh sìos de Optical fuaim chùl. Mar thoradh air gu bheil mòran de na stuthan a chleachdadh ann an dealbhadh agus criathragan lionsan 'taisbeanadh cuid de autofluorescence, oidhirpean saidheans anns na tràth ìrean a bha suidheachadh gus an dèanamh co-phàirtean a bhith ìosal fluorescence. Ach, an dèidh sin deuchainnean air stiùireadh ùr a co-dhùnaidhean. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Gu sònraichte, chaidh a lorg gun fluorescence microscopy, stèidhichte air meòrachadh gu h-iomlan taobh a-staigh, tha e a 'leigeil a choileanadh ìosal chùl agus àrd dian excitation solas.

uidheam

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. Tha na prionnsabalan fluorescence microscopy, stèidhichte air meòrachadh gu h-iomlan taobh a-staigh a tha a 'cleachdadh evanescent tonn no evanescent. Tha e a 'tachairt aig a' chrìoch eadar meadhanan le diofar refractive Indices. Anns a 'chùis seo, tha an solas a-sail a' dol tro na priosam. Tha àrd refractive Clàr-ìnnse paramadair.

Tha priosam ri taobh an aqueous fuasgladh no glainne le ìosal paramadair. Ma tha sail solais a stiùireadh aig e aig ceàrn a tha nas breithneachail, air an sail a tha gu tur a 'nochdadh bhon eadar-aghaidh. Iongantas seo, ann an tionndadh, ag adhbharachadh nonpropagating tonn. Ann am briathran eile, tha an dealan a chruthachadh achadh a penetrates a-steach tro mheadhan le ìsle refractive Clàr-ìnnse paramadair ri astar nas lugha na 200 nanometers.

Tha evanescent tonn dian an solas a bhiodh gu leòr airson excite fluorophores. Ach, air sgàth a uabhasach beag doimhneachd, an tomhas-lìonaidh a bhios glè bheag. Tha seo a 'ìre-ìosal' chùl.

mion-atharrachaidh

Fluorescence microscopy tha stèidhichte air gu h-iomlan taobh a-staigh meòrachaidh, faodar an cur an gnìomh le epi-soillseachadh. Tha feum air lionsan le àrd-àireamhach fhosglaidh (1.4 co-dhiù, ach tha e ion-mhiannaichte a ràinig e 1.45-1.6), agus pàirt dheth a shoillseachadh uidheam achadh. Tha an dàrna a choileanadh le beag àite meud. Airson barrachd ionannachd a 'cleachdadh caol fàinne, a tha air bacadh a chur le cuibhrionn an allt. Airson a 'breithneachail ceàrn, an dèidh a tha gu h-iomlan meòrachaidh, feumaidh sinn ìre àrd de refraction an bogaidh tro mheadhan ann an lionsa agus an còmhdach glainne a' miocroscop.